纳米抗体淘选

       纳米抗体淘选是从免疫或天然文库中，通过多轮 “吸附 - 洗涤 - 洗脱 - 扩增” 的生物淘选（Biopanning）富集并筛选出特异性结合靶抗原的 VHH 克隆的核心技术，主流依赖噬菌体展示、酵母展示等平台，配合固相 / 磁珠 / 细胞分选等策略，经 3-5 轮严格淘选与 ELISA、测序、亲和力验证，最终获得高特异性、高亲和力纳米抗体。

一、核心流程（以噬菌体展示为例)
    1. 文库准备
        免疫建库：用靶抗原免疫羊驼 / 骆驼，从外周血淋巴细胞提取 RNA，逆转录为 cDNA，PCR 扩增 VHH 基因，插入 M13 噬菌体 PⅢ 蛋白基因，构建库容 10⁸-10¹⁰的噬菌体展示文库。
        天然文库：无需免疫，直接从驼科动物淋巴细胞构建，库容可达 10¹⁰-10¹²，适合难免疫抗原。
    2.淘选循环（3-5 轮，逐轮提升严格性）

    3.阳性克隆鉴定
ELISA 筛选：挑取单克隆培养，诱导表达后用抗原包被板检测结合活性，设置 BSA 等阴性对照排除假阳性。
测序与序列比对：阳性克隆测序，分析 CDR 区多样性，排除重复序列。
亲和力与功能验证：用 BLI/SPR 测 KD 值，WB/IP/ 细胞实验验证特异性与生物学功能。

二、应用与前景
科研工具：用于蛋白质纯化、结构解析、分子互作研究（如 Co-IP、FRET 探针）。
诊断试剂：构建高特异性 ELISA、 lateral flow、电化学传感器，检测肿瘤标志物、病原体抗原。
治疗药物：开发肿瘤靶向、抗炎、抗病毒纳米抗体，如 Caplacizumab（抗 vWF 纳米抗体，治疗血栓）。