多克隆抗体制备
多克隆抗体（Polyclonal Antibody，pAb）是由多种 B 细胞克隆分泌、可识别抗原多个表位的混合抗体，制备核心为通过抗原免疫实验动物，诱导机体产生特异性体液免疫应答，再从免疫血清中分离纯化获得
一、核心制备原理
用纯化的靶抗原（蛋白 / 多肽 / 小分子偶联物等）免疫动物，抗原经机体抗原呈递细胞处理后，激活不同表位对应的 B 细胞克隆，B 细胞分化为浆细胞并分泌特异性 IgG（为主）、IgM 等抗体，抗体随体液循环进入血清；通过多次加强免疫提升血清中抗体滴度，最终从抗血清中纯化得到多克隆抗体，其产物为针对抗原不同表位的抗体混合物，具备结合范围广、耐受性强的特点。
二、经典制备流程（周期 2-3 个月）
整体为抗原准备→动物免疫→效价监测→抗血清采集→抗体纯化→质控检测的标准化流程，适配鼠、兔、山羊、绵羊等常见实验动物，其中兔源多抗因效价高、易饲养为科研主流选择，山羊 / 绵羊适用于大剂量抗血清需求。
- 抗原准备：纯化靶抗原（纯度≥80%），小分子抗原（如多肽、激素）需与载体蛋白（BSA、KLH）偶联增强免疫原性，制备成免疫原；
- 动物免疫：初次免疫采用弗氏完全佐剂（CFA）与免疫原乳化，皮下 / 腹腔多点注射；后续 2-3 次加强免疫用弗氏不完全佐剂（IFA），间隔 2-3 周，降低佐剂毒性同时维持免疫应答；
- 效价监测：末次免疫后 7-10 天，采集少量动物血清，通过间接 ELISA检测抗体滴度（常用判定标准：滴度≥1:10000 为合格），滴度达标则进行大量采血；
- 抗血清采集：根据动物类型选择采血方式，兔 / 鼠可采用耳缘静脉采血、心脏采血，山羊 / 绵羊可颈动脉采血，收集的全血室温静置后离心，分离获得粗制抗血清；
- 抗体纯化：从抗血清中去除杂蛋白、非特异性抗体，主流方法为抗原亲和层析（特异性最高，可获高纯度抗体制剂），也可采用 Protein A/G/L 亲和层析（通用型，快速纯化 IgG 组分）、硫酸铵盐析（粗纯，适用于低成本需求）；
- 质控检测：检测纯化后抗体的效价、纯度、特异性，核心指标为：纯度≥90%（科研级）、ELISA 滴度≥1:50000、WB / 免疫组化（IHC）验证无交叉反应，同时定量抗体浓度（BCA/Bradford 法）。
三、常用实验动物及适配场景
不同动物的抗血清产量、饲养成本、抗体特性不同，按需选择即可，核心适配场景如下：
| 实验动物 | 单次抗血清产量 | 抗体滴度特点 | 核心适用场景 |
|---|---|---|---|
| 小鼠（BALB/c） | 1-5mL / 只 | 中等 | 少量需求、预实验、抗原效价初筛 |
| 新西兰兔 | 20-50mL / 只 | 高（易达 1:100000+） | 科研主流、常规实验（WB/ELISA/IHC） |
| 山羊 / 绵羊 | 200-500mL / 只 | 高且稳定 | 大剂量需求、工业级试剂生产、免疫亲和层析填料制备 |
| 大鼠 | 5-10mL / 只 | 中等 | 特殊抗原免疫、与小鼠实验配套使用 |
四、核心特点（与单克隆抗体对比）
优势
- 制备周期短（2-3 个月）、操作简单、成本远低于单抗，无需细胞融合、克隆筛选等复杂步骤；
- 识别抗原多个表位，结合稳定性强，对抗原的微小结构变化（如轻微变性、修饰）耐受性高；
- 可快速制备，适配紧急实验需求，也可用于新抗原的初步功能验证；
- 抗血清可多次采集（如兔、山羊），能获得一定量的抗体产物，满足常规实验重复使用。
局限性
- 为抗体混合物，特异性相对较低，易与同源蛋白发生交叉反应，不适用于精准定量、蛋白分型等实验；
- 批次间差异大，同一动物不同次采血、不同动物同抗原免疫的抗体，效价和特异性存在波动，无法标准化；
- 无法无限量制备，抗血清产量受动物个体限制，且难以进行基因水平改造（如人源化）；
- 部分动物（如山羊）饲养成本较高，小剂量需求时性价比低。
五、核心应用场景
多克隆抗体因性价比高、适用性广，是生物科研、常规检测的基础试剂，核心应用为：
- 基础科研实验：Western Blot、免疫沉淀（IP）、免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）、普通 ELISA 等，用于蛋白的定性检测、定位分析；
- 常规检测试剂：食品、环境领域的快速检测（如农药残留、病原体初筛），科研级试剂盒的配套试剂；
- 工业与辅助应用：蛋白纯化的免疫亲和层析填料制备、单抗筛选的阳性对照、应急生物检测的初步试剂；
- 预实验验证：新抗原的免疫原性验证、抗体检测方法的体系摸索，为后续单克隆抗体制备提供前期数据。
六、关键质控指标
合格的多克隆抗体需满足核心质控要求，确保实验有效性，主要指标为：
- 效价：ELISA 间接法检测，滴度≥1:10000（粗血清）/≥1:50000（纯化抗体）；
- 纯度：SDS-PAGE 电泳检测，科研级≥90%，检测级≥95%；
- 特异性：通过 WB、IHC 验证，仅识别靶抗原，无明显杂带 / 非特异性染色；
- 浓度：常规纯化后抗体浓度≥1mg/mL，满足实验直接使用（无需额外浓缩）。
